Diagnoza bezpośrednia za pomocą analizy DNA zespołu łamliwego chromosomu Q umysłowego opóźnienia ad

Nazywamy to wzrostem premutacją , ponieważ poprzedza pojawienie się pełnej mutacji w kolejnych pokoleniach. Stwierdzono, że przejście od premutacji do pełnej mutacji występuje często, ale tylko wtedy, gdy zmutowany gen był przenoszony przez matkę. Z badania miejsc restrykcyjnych, które są hamowane przez metylację DNA, doszliśmy do wniosku, że fragmenty odpowiadające pełnej mutacji są nieprawidłowo metylowane u dotkniętych samców i na aktywnym chromosomie X samic, natomiast fragmenty odpowiadające premutacji lub sekwencji normalnej są tylko metylowane na nieaktywnym chromosomie X u kobiet. Opisujemy zastosowanie sondy DNA, która pozwala na łatwe, wiarygodne i bezpośrednie rozpoznanie u nosicieli wrażliwych mutacji X, niezależnie od płci i stanu klinicznego, i to ma zastosowanie do wczesnej diagnostyki prenatalnej. Oceniamy także przewidywalność stanu psychicznego na podstawie analizy DNA. Metody
Przeanalizowaliśmy genomowy DNA od 530 osób: 511 członków 63 rodzin z zespołem łamliwego chromosomu X (w tym 28 próbek prenatalnych) i 19 niespokrewnionych zdrowych osób. Analizę cytogenetyczną wrażliwego miejsca X przeprowadzono zgodnie ze standardowymi procedurami.13 Stan psychiczny badanych uważano za zgłoszony przez klinicystów biorących udział w badaniu. W większości przypadków DNA ekstrahowano z leukocytów. Trawienie DNA przez EcoRI i EagI przeprowadzono w buforze zawierającym 20 mM roztwór chlorku magnezu. Elektroforezę przeprowadzono na 0,8% żelu agarozowym, z 20-centymetrową migracją błękitu bromofenolowego. Próbki DNA przeniesiono na Hybond N + (Amersham) i hybrydyzowano w 40% formamidzie, jak to opisano w innym miejscu. 17 Bloty przemyto 0,5 raza solanką cytrynianu sodu (SSC, x SSC zawiera 150 mM chlorek sodu i 15 mM cytrynian sodu) i 0,1 procent dodecylosiarczanu sodu w 60 ° C.
Artefakty, takie jak zanieczyszczenie strawionych próbek DNA plazmidami lub niekompletne trawienie, mogą generować fałszywe pasma i prowadzić do fałszywych wniosków. Rozległa heterogeniczność powodowana przez dalszą mutację somatyczną u niektórych nosicieli pełnej mutacji może powodować, że fragmenty pojawiają się jako rozmaz. Konieczny jest zatem wysoki stosunek sygnału do tła i jest on preferowany przez wielkość sondy StB12.3 i brak powtarzających się sekwencji w sondzie. Większość tych problemów można ocenić przez rehybrydyzację błota do kontrolnej ludzkiej sondy (zawierającej wektor plazmidowy), takiej jak sonda F33,16, która wykrywa wyraźną zależną od płci różnicę we wzorach EcoRI i trawienia EagI.
Wyniki
Wzorce wykrywane przez sondę StB12.3
Rysunek 1. Rysunek 1. Schematyczne przedstawienie normalnych i zmutowanych fragmentów restrykcyjnych wykrytych przez sondę StB12.3. Wskazano lokalizacje sondy StB12.3 (czarny pasek) i miejsca restrykcyjnego EagI w fragmencie EcoRI 5,2 kb. Otwarte pole wokół strony EagI odpowiada wyspie CpG; obejmuje zmienną sekwencję docelową (obszar zacieniowany), która zwiększa się wraz ze stopniem mutacji. . oznacza wzrost rozmiaru fragmentu. Pokazano fragmenty hybrydyzujące ze StB12.3 w ekstrakcjach EcoRI-EagI; gdy miejsce EagI jest metylowane (na nieaktywnym chromosomie X u kobiet lub gdy występuje pełna mutacja), obserwuje się dłuższy fragment EcoRI-EcoRI.
Mutacje związane z zespołem łamliwego chromosomu X wpływają na fragment o wielkości 200 pz, bardzo bogaty w dinukleotydy CpG, które są podatne na metylację (wyspa CpG) (ryc.
[patrz też: dyżury aptek olecko, mleko z orzechów laskowych, nieulotne cda ]