Diagnostyka prenatalna zespołu łamliwego chromosomu X poprzez bezpośrednie wykrywanie niestabilnej sekwencji DNA ad

Reakcja łańcuchowa polimerazy z użyciem starterów specyficznych dla chromosomu Y8 wykazała, że płód był męski; zostało to potwierdzone przez krótkotrwałą hodowlę próbki biopsyjnej, która ujawniła prawidłowy męski kariotyp. Analiza Southern blot za pomocą sondy pfxa3 wykazała, że płód ma allel 2,3 kb (ryc. 2). Allele tej wielkości są typowe dla symptomatycznych mężczyzn z kruchym genotypem X. Normalne samce mają allel 1,0 kb, podczas gdy bezobjawowe samce nosicieli mają wielkości od 1,1 do 1,6 kb (dane niepublikowane). Rodzice zostali poinformowani, że płód był mężczyzną i miał ponad 99% szansy4 na posiadanie kruchego genotypu X, na podstawie badań z połączonymi polimorfizmami DNA w loci DXS297 i DXS296, które flankują miejsce kruche. Ponadto wyniki uzyskane przy pomocy pfxa36 zostały wyjaśnione rodzicom. Zdecydowali się zakończyć ciążę z powodu wyników dwóch testów DNA ze świadomością, że w ich przypadku wynik normalnego testu chromosomowego nie może wykluczyć diagnozy zespołu łamliwego chromosomu X. Ciąża została zakończona przez odsysanie macicy. Hodowane komórki płodowe i komórki kosmówkowo-kosmówkowe w długookresowej kulturze wyrażały wrażliwy chromosom X. Metody
Analiza cytogenetyczna
Bezpośrednią trzydniową hodowlę próbki kosmówkowej i kosmówki wykonano jak opisano w innym miejscu. 9 Długotrwałe hodowle tej tkanki oraz tkanki skóry i mięśni płodu uzyskane w czasie zakończenia ciąży ustalono w pożywce Chang i przeniesiono na podłoże Ham F10 na 48 godzin przed indukcją wrażliwego chromosomu X przez ekspozycję na 0,05 .M fluorodeoksyurydyny lub 300 mg tymidyny na litr roztworu, jak to opisano gdzie indziej.
Reakcja łańcuchowa polimerazy
Płeć płodu została określona przy użyciu starterów dla powtórzenia specyficznego dla chromosomu Y (Y1.1 i Y 1.2) i warunków reakcji jak opisano w innym miejscu8 w reakcji łańcuchowej polimerazy. Produkty reakcji poddano elektroforezie na 1,4% żelu agarozowym i wizualizowano przez barwienie bromkiem etydyny. Genotypy w locus DXS297 zostały określone w sposób opisany w innym miejscu.7
Analiza Southern Blot
DNA ekstrahowano z leukocytów krwi uzyskanych od członków rodziny, z próbki kosmówki i kosmówki oraz z tkanki płodowej uzyskanej po zakończeniu ciąży. Osiem mikrogramów DNA trawiono do końca za pomocą enzymów restrykcyjnych PstI i TaqI. Elektroforezę i hybrydyzację Southern przeprowadzono w sposób opisany w innym miejscu (dane niepublikowane). Błona TaqI sondowano VK21A4 w celu określenia polimorfizmów w locus DXS296. Blot PstI był jednocześnie sondowany za pomocą pfxa35 i pS8. Sonda pfxa3 (Oncor, Gaithersburg, Md.) Wykrywa stałe pasmo 1,0 kb we wszystkich nienośnych; ta sonda jest fragmentem o długości 520 pz uwolnionym przez trawienie PstI z większego fragmentu genomu sklonowanego w pUC18. Sonda kontrolna pS8 wykrywa stałe pasmo 800 bp u wszystkich osobników, które nie pokrywa się z rozkładem wielkości fragmentów PstI wykrywalnych za pomocą pfxa3. Sonda pS8 jest fragmentem PstI o wielkości 800 pz z subklonu YAC XY539 w regionie locus DXS296
[patrz też: seminogram kraków, olx kłobuck, feroplex ]