Aktywacja Mutacji Stymulującego białka G w zespole McCune-Albrighta ad

W tym badaniu zamplifikowaliśmy fragmenty genomowego DNA obejmujące miejsca znanych mutacji mutacji missens Gs. (Arg201 w eksonie 8 i Gin227 w eksonie 9) z tkanek od pacjentów z zespołem McCune-Albright a za pomocą reakcji łańcuchowej polimerazy (PCR) i badań przesiewowych dla mutacji przy użyciu elektroforezy w żelu denaturującym (DGGE) i hybrydyzacji oligonukleotydów specyficznych dla allelu. Stosując to podejście, zidentyfikowaliśmy aktywujące mutacje somatyczne Gs. w tkankach od czterech pacjentów z zespołem McCune-Albrighta. Metody
Pacjenci
Czterech badanych pacjentów miało klasyczne cechy zespołu McCune-Albrighta, w tym prekursję płciową, pigmentację café au lait i dysplazję włóknistą włóknisto-włóknistą. Pobrano wiele próbek tkanek, uzyskanych chirurgicznie lub podczas autopsji, u wszystkich czterech pacjentów.
Pacjent był trzyletnią dziewczynką z łagodną nadczynnością tarczycy, opóźnieniem wzrostu, opóźnieniem rozwoju i przewlekłym niewyjaśnionym podwyższeniem poziomów enzymów wątrobowych w surowicy. Urodziła się w 39 tygodniu ciąży, ważąc 2,1 kg i mierzy 47 cm długości. Miała przejściową bezpośrednią hiperbilirubinemię, która ustąpiła przed trzecim tygodniem życia, ale utrzymywały się podwyższone stężenia enzymów wątrobowych w surowicy. W wieku jednego roku miała poziom aminotransferazy asparaginianowej w surowicy wynoszący 329 U na litr, poziom aminotransferazy alaninowej 324 U na litr i poziom y-glutamylotransferazy wynoszący 1113 U na litr; biopsja wątroby wykazała jedynie łagodne centralne przekrwienie zrazików. Następnie została oceniona w National Institute of Child Health and Human Development, Bethesda, Maryland. Stężenie estrogenu w surowicy było podwyższone, a odpowiedź gonadotropiny w surowicy na hormon uwalniający hormon luteinizujący dwa razy była wyjątkowo niska, co wskazuje na autonomiczną funkcję jajników. Z powodu uporczywego, ciężkiego krwawienia z pochwy, progresywnego postępu wieku kostnego i niezadowalającej odpowiedzi na testolakton, inhibitor syntezy estrogenu, pacjent przeszedł obustronną wycięcie jajników w wieku dwóch lat i pięciu miesięcy. Badanie patologiczne jajników wykazało zgrubienie torebki, wiele pęcherzyków we wszystkich stadiach rozwoju – niektóre torbiele rozszerzone – i obszary zrębu luteinizowanego. Analiza próbki wątrobowej uzyskanej podczas zabiegu wykazała łagodne, niespecyficzne zmiany. Badano zamrożone i zatopione w parafinie próbki z obu jajników, tkanki zatopionej w parafinie z drugiej biopsji wątroby i próbki krwi.
Pacjent 2 był ciężko chorym chłopcem z hiperkortyzolem, wole, gruczolakiem przysadki i chorobą sercowo-płucną, który zmarł nagle w wieku 17,226. Historia kliniczna Pacjenta 3, ciężko chorego chłopca z hiperkortyzolemią, nadczynnością tarczycy i nadmiernym wydzielaniem hormonu wzrostu, została opisane wcześniej. 4 Pacjentka miała niewyjaśnione zatrzymanie krążenia i zmarła w wieku pięciu lat po operacji ortopedycznej. Tarczyca i przysadka nie były dostępne do analizy. Historia kliniczna i patologiczne zmiany w Pacjentce 4, dziewczynce z wrodzonym zespołem Cushinga, zostały opisane w innym miejscu.5 Nadnercza nie były dostępne do analizy.
Przygotowanie DNA
DNA wyizolowano z próbek zatopionych w parafinie, 20 próbek krwi, 27 lub zamrożonych tkanek28. Slajdy barwione hematoksyliną i eozyną zostały użyte do zidentyfikowania obszarów zainteresowania w cienkich, zatopionych w parafinie sekcjach
[podobne: siłownie plenerowe, seminogram kraków, dyżury aptek olecko ]